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Nature子刊重磅!LILRB4抗體讓白血病細胞“現(xiàn)形“

更新時間:2025-07-10   點擊次數(shù):43次

急性髓系白血病(AML)作為惡性程度最高的血液腫瘤之一,其對傳統(tǒng)化療及免疫治療的耐藥性問題長期困擾臨床。近年研究發(fā)現(xiàn),腫瘤細胞通過劫持免疫檢查點分子實現(xiàn)"免疫逃逸",但針對AML的特異性免疫抑制機制仍存在巨大認知盲區(qū)。本研究首-次揭示,LILRB4/APOE信號軸通過重構(gòu)腫瘤微環(huán)境,形成"免疫沉默-代謝重編程"雙重防御體系,為AML精準治療開辟全新路徑。

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本研究首-次揭示LILRB4通過"配體-受體-信號-效應"四層架構(gòu)調(diào)控AML免疫逃逸與轉(zhuǎn)移,提出"免疫抑制-代謝重編程"雙軌機制假說。靶向LILRB4的抗體療法在臨床前模型中展現(xiàn)出高效低毒特性,為單核細胞AML精準治療提供新策略。相關成果已申請國際專-利(PCT/US2016/020838),并與Immune-Onc Therapeutics公司達成轉(zhuǎn)化合作。

 

研究方法

1. 臨床樣本分析

  • 利用TCGA數(shù)據(jù)庫分析LILRB4 mRNA表達水平與AML患者預后的相關性,發(fā)現(xiàn)其高表達與生存期縮短顯著相關。

  • 流式細胞術驗證LILRB4在單核細胞AML(FAB M4/M5亞型)中特異性高表達于腫瘤細胞表面,且高于正常單核細胞。

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2. 功能驗證

  • 體外實驗:通過CRISPR/Cas9構(gòu)建LILRB4敲除細胞系(lilrb4-KO),結(jié)合野生型(WT)及回補細胞(lilrb4-KO-wt),利用Transwell共培養(yǎng)體系評估T細胞增殖抑制能力。

  • 體內(nèi)模型:建立人源化免疫缺陷小鼠(NSG)及同源小鼠(C57BL/6)異種移植模型,通過皮下注射或靜脈移植LILRB4敲除/過表達的AML細胞,監(jiān)測腫瘤生長及T細胞浸潤情況。

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3. 機制解析

  • 配體鑒定:通過蛋白液相色譜(FPLC)、質(zhì)譜(MS)及表面等離子共振(SPR)技術篩選并驗證APOE為LILRB4特異性配體,結(jié)合常數(shù)(KD)為210 nM。

  • 信號通路分析:采用Western blot、免疫沉淀(Co-IP)及RNA測序(RNA-seq)探究下游信號通路,發(fā)現(xiàn)LILRB4通過SHP-2磷酸化激活NF-κB通路,誘導uPAR及ARG1表達。

  • 功能挽救實驗:通過外源性補充APOE、uPAR或ARG1,驗證其對T細胞抑制及腫瘤浸潤的調(diào)控作用。

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研究結(jié)果

1. LILRB4表達與AML預后及免疫抑制密切相關

  • TCGA數(shù)據(jù)顯示,LILRB4高表達組患者總生存期顯著縮短(HR=2.34, p=0.0003),且其表達水平與T細胞耗竭標志物(PD-1、TIM-3)呈正相關。

  • 體外共培養(yǎng)證實,LILRB4+ AML細胞通過胞內(nèi)段傳遞抑制信號,顯著降低CD8+ T細胞增殖及IFN-γ分泌能力。

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2. LILRB4通過APOE介導的信號軸調(diào)控T細胞抑制與腫瘤浸潤

  • 配體結(jié)合:APOE通過其N端結(jié)構(gòu)域與LILRB4的Ig樣結(jié)構(gòu)域結(jié)合,激活下游SHP-2磷酸化(p-Y580),進而促進NF-κB入核,上調(diào)uPAR及ARG1表達。

  • 功能依賴性:LILRB4敲除顯著抑制THP-1細胞的跨內(nèi)皮遷移能力(p<0.01),而APOE或uPAR回補可部分恢復其侵襲表型。

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3. 靶向LILRB4的治療潛力

  • 體內(nèi)驗證:抗LILRB4抗體(Fc工程化改造以降低ADCC效應)顯著抑制AML異種移植瘤生長(腫瘤體積減少67%,p<0.001),并延長荷瘤小鼠生存期(中位生存期從28天延長至45天)。

  • 免疫重塑:抗體治療促進腫瘤微環(huán)境中CD8+ T細胞浸潤(浸潤指數(shù)↑3.2倍),并增強其殺傷活性(顆粒酶B+ T細胞比例↑40%)。

  • 安全性評估:正常造血干細胞(CD34+)表面LILRB4表達極低(MFI=12±3 vs. AML細胞MFI=120±15),抗體處理未影響人源化小鼠骨髓重建效率。

 

ATHENS為本研究所提供的產(chǎn)品

Athens Research & Biotechnology為本研究提供了多種APO家族蛋白(尤其是重組人APOE),直接支持了LILRB4配體篩選、信號通路解析及功能驗證,是揭示“APOE/LILRB4軸"在白血病免疫逃逸中作用的關鍵合作伙伴。

具體產(chǎn)品:

APOA1

APOA2

APOA4

APOB

APOC1

APOC2

APOC3

hAPOE

 

功能用途:

  • 作為候選配體,通過 蛋白液相色譜(FPLC) 和 表面等離子共振(SPR) 篩選,驗證其與 LILRB4 的結(jié)合能力。

  • 用于 體外實驗 中模擬生理條件下APOE對LILRB4的激活作用,證明其通過特定結(jié)構(gòu)域(如Ig樣結(jié)構(gòu)域)與LILRB4相互作用。




關于ATHENS

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